牛病毒性腹泻病毒SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及其应用

• 作者: 刘存 崔尚金
• 来源期刊: 现代畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 荧光定量PCR方法 检测方法
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: S852.695.5
• 字数: 4194字
• 语种: 中文

摘要

为了建立BVDV快速诊断方法,针对BVDV基因组5'UTR序列保守区域设计了荧光定量PCR引物,并建立了快速检测BVDV的荧光定量PCR方法.结果表明,以构建的重组质粒pMD-5'UTR为标准品建立的SYBR Green荧光定量PCR方法标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9973;敏感性试验结果显示,该方法敏感性较好,其最低检测下限为10拷贝.重复性试验结果显示,该方法批内和批间的变异系数为均小于5％,表明该方法的重复性良好.特异性试验显示,该方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒不存在交叉反应,但其不可区别鉴定BVDV与猪瘟病毒.应用所建立的SYBR Green荧光定量PCR方法测定非致细胞病变型BVDV(BVDV-BJ-2016株)分离毒株的一步生长曲线,发现在感染后12～48 h为其对数生长期.该研究为研究非致细胞病变型生长特性提供了参考.