吸水链霉菌5008中谷氨酸脱氢酶SHJG_7666的性质表征

• 作者: 冯雁 刘璋敏 崔莉 巢佳佳 李谦
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酸脱氢酶 氮代谢 井冈霉素 同源建模 酶学性质表征
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 360-368
• 页数: 9页
• 分类号: Q814
• 字数: 6490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20180316

摘要

谷氨酸脱氢酶可在NAD(P)H辅因子协助下催化α-酮戊二酸和谷氨酸之间的转化,是氮代谢途径的关键酶.基于基因组BLAST分析预测,吸水链霉菌5008(S5008)中SHJG_7666 是谷氨酸脱氢酶的编码基因.本研究在大肠杆菌中对SHJG_7666蛋白进行了异源表达,并对其酶学性质进行了表征.系统发育树及同源建模结构分析显示SHJG_7666 具有保守的谷氨酸、α-酮戊二酸结合域以及经典的GXGXXG二核苷酸结合基序,其活性中心由Lys60,Lys78,Asp120催化功能位点及Ser36,Gly38,Gln119,Asp166,Asn300,Ala330谷氨酸、α-酮戊二酸结合位点组成,属于Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶家族;体外生化实验显示,其催化α-酮戊二酸转化为谷氨酸的最适pH和温度分别为7. 5和37 ℃,对底物α-酮戊二酸Km为(25. 3 ±9. 1 )μmol/L, kcat为(3 ±0. 8)×10 -5s-1.本研究验证了SHJG_7666谷氨酸脱氢酶的催化功能,揭示了其活性中心关键氨基酸残基,为利用蛋白质工程手段对SHJG_7666进行分子设计以提高其催化活力,进一步利用代谢工程手段对宿主氮代谢进行调控奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李谦	中国药科大学生命科学与技术学院	50	268	11.0	15.0
2	冯雁	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	15	10	2.0	2.0
3	刘璋敏	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	4	2	1.0	1.0
4	崔莉	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	4	2	1.0	1.0
5	巢佳佳	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	1	1	1.0	1.0