抗CD133单链抗体/白喉毒素DAB389融合蛋白的基因构建、表达、纯化及鉴定

• 作者: 仲炜 杨景朴 牙韩盛 王宗贵 王海涛 程金章 赵胤 陈俊俊
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: CD133单链抗体 白喉毒素 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1632-1635
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2018.09.055

摘要

目的 构建抗CD133单链抗体(scFV)/白喉毒素DAB389融合蛋白,在大肠杆菌里表达,并鉴定及纯化.方法 采用PCR的方法,扩增融合基因DAB389-Linker-CD133 (scFV),并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a-DAB389-CD133,融合蛋白在BL21 (DE3)中表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定,通过Ni柱纯化目的蛋白,获得了纯度达95％的DAB389-Linker--CD133 (scFV)融合蛋白.Western blot鉴定蛋白活性.流式细胞仪检测能否与CD133抗原特异性结合.结果 扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;纯化得到纯度为95％的重组蛋白.Western blot分析能特异性地与抗白喉抗体结合.流式细胞仪检测能与CD133抗原特异性结合.结论 成功构建了抗CD133单链抗体(scFV)/白喉毒素DAB389融合蛋白,具有结合抗原和免疫毒素双重活性,为进一步靶向治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宗贵		36	130	6.0	10.0
2	程金章		15	19	3.0	4.0
3	王海涛		44	172	6.0	11.0
4	赵胤		31	55	4.0	6.0
5	杨景朴		24	53	4.0	6.0
6	陈俊俊		5	11	1.0	3.0
7	仲炜		9	31	3.0	5.0
8	牙韩盛		1	0	0.0	0.0