铜绿假单胞菌F190—342-I21—83基因的克隆及其融合蛋白的原核表达

• 作者: 孙长江 崔子寅 张明亮 闫新武 韩文瑜 顾敬敏
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 F基因 I基因 克隆 融合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 132-136,150
• 页数: 6页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.12.021

摘要

为了研究铜绿假单胞菌外膜蛋白F和I的重要表位,根据已公布的F和I基因序列设计2对特异性引物,以分离的水貂源铜绿假单胞菌ZHDL9基因组为模板,扩增重要的表位基因F190—342(F1)和I21—83(I2),并对得到的2段基因序列进行生物信息学分析.结果表明,PCR扩增所得F1和I2两段基因序列高度保守,不存在核苷酸的插入和缺失;通过融合PCR技术将得到的F1基因和I2基因无缝连接,得到651 bp的融合基因F1I2.将融合基因F1I2克隆至原核表达载体p ET-28a,成功构建了融合表达质粒p ET-28a-F1I2;将pET-28a-F1I2转化大肠杆菌BL21(DE3),成功构建重组菌株BL21(pET-28a-F1I2),并对重组菌株进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE检测表明,成功表达了融合蛋白F1I2,且融合蛋白能够被His镍柱纯化;Western Blotting检测表明,表达的融合蛋白F1I2与铜绿假单胞菌ZHDL9菌株感染的水貂血清具有较好的反应原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩文瑜	吉林大学动物医学学院	159	1086	16.0	26.0
2	孙长江	吉林大学动物医学学院	56	448	11.0	19.0
3	顾敬敏	吉林大学动物医学学院	23	136	7.0	11.0
4	张明亮		11	1	1.0	1.0
13	崔子寅	吉林大学动物医学学院	6	69	2.0	6.0