小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘萍 周建华 李林杰 柏家林 王悦萦 郭富城 马晓霞 马鹏
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒(PPRV) SYBRGreenⅠ 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（z1）
• 页码范围: 84-88
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.S1.014

摘要

为了建立一种快速检测小反刍兽疫病毒的方法.根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1株H基因序列设计2对引物,PCR扩增出1830 bp H基因,构建标准质粒pMD-18-H.以标准质粒优化反应条件,建立了小反刍兽疫病毒H基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法.最优反应体系25μL:2×SYBR qPCR Mix 12.5μL,模板DNA 1μL,特异引物各0.2μL(0.2μmol/L),DEPC H2O 10.5μL;最佳反应条件:94℃2 min;94℃5 s,57℃30 s,40个循环,Ct值与标准质粒模板浓度在3.28×104～3.28×10-2 copies/μL 7个浓度梯度呈良好线性关系y=-2.913x+36.904,斜率为-2.913,扩增效率120.5％,相关系数R2=0.994.建立的实时荧光定量PCR检测方法比普通PCR灵敏度高10000倍,稳定性好,特异性强,对PPRV的准确诊断和定量检测具有重要意义.