抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达和活性研究

• 作者: 王小红 胡莉
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: AFB1 单链抗体 大肠杆菌 毕赤酵母 ELISA
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 26-31
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 7037字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2018.01.026

摘要

为了提高黄曲霉毒素 B1(aflatoxin B1,AFB1)单链抗体(single chain Fv fragment, scFv)的表达量和生物活性,将从杂交瘤细胞株2C10中反转录后经基因拼接技术获得的scFv片段基因分别构建到E.coli表达载体pET-30a中和酵母表达载体pPICZαA中进行比较.重组质粒pET-30a-pelB-scFv构建好后转化到BL21(DE3)中进行IPTG诱导蛋白表达,重组质粒pPICZαA-scFv构建完成经线性化后,经电转化法转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导蛋白表达.表达蛋白经镍离子亲和层析法进行纯化,后检测其生物学活性.结果显示抗AFB1scFv获得了高效表达,在大肠表达系统和酵母表达系统中表达量分别是34 mg/L 和132 mg/L,目的蛋白大小为29 ku左右.纯化后的蛋白经SDS-PAGE,Western blot和ELISA对其进行性质分析,得知抗 AFB1 scFv蛋白具有很好的生物学活性,且灵敏度分别为40 μg/mL 和35 μg/mL.酵母表达系统与E.coli BL21(DE3) 表达系统相比,虽然scFv灵敏度转好,但仍有较大提升空间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王小红	华中农业大学食品科技学院	55	626	14.0	24.0
2	胡莉	黄淮学院生物与食品工程学院	11	8	2.0	2.0