带FLAG标签的CDK4真核表达载体构建及对喉癌细胞的影响

• 作者: 刘佳 吴亚更 王雪峰 陈建国 马晓燕
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 喉肿瘤 Hep-2 细胞周期蛋白依赖激酶4 聚合酶链反应 克隆形成 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 512-516
• 页数: 5页
• 分类号: R739.65
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.07.008

摘要

目的 构建带Flag标签的pcDNA3.0载体细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase,CDK4)的真核表达载体,验证该基因对喉癌Hep-2细胞增殖的影响.方法 以人乳腺文库为模板采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出CDK4的CDS区编码序列,应用双酶切将带Flag标签pcDNA3.0载体插入到PCR产物上,转化DH5α提取质粒,测序正确后转染喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4基因的转录水平,蛋白质印迹鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法和克隆形成实验测定其对喉癌Hep-2细胞生长的影响.结果 pcDNA3.0-Flag-CDK4真核表达载体构建成功;提取质粒转染Hep-2细胞,qRT-PCR技术检测到该基因在Hep-2中转录水平明显增高;蛋白质印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明CDK4基因可促进Hep-2细胞增殖.结论 pcDNA3.0-Flag-CDK4真核表达载体构建成功并验证该基因促进喉癌细胞增殖,为进一步研究该基因在喉癌中的发生发展奠定了前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈建国	锦州医科大学附属第一医院耳鼻喉头颈外科	6	7	2.0	2.0
2	王雪峰	锦州医科大学附属第一医院耳鼻喉头颈外科	9	5	1.0	2.0
3	马晓燕	长春中医药大学附属医院心内科	14	19	3.0	4.0
4	刘佳	海军总医院感染控制科	8	41	4.0	6.0
5	吴亚更	锦州医科大学附属第一医院耳鼻喉头颈外科	4	4	1.0	2.0