短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制β-catenin表达的CPCs的构建

• 作者: 余晓俊 孙靓 崔博 张明 徐鹏 曾强 樊琳 顾清
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 耳蜗前体细胞 β-catenin 短发夹RNA慢病毒载体构建
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 150-153
• 页数: 4页
• 字数: 4051字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2018.02.019

摘要

目的 构建干扰大鼠耳蜗前体细胞(CPCs)β-catenin基因的短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒载体,并对构建的载体进行鉴定.方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增β-catenin基因,根据β-catenin基因设计shRNA oligo构建干扰载体,利用Gateway技术构建携带β-catenin基因的shRNA慢病毒载体,将构建好的慢病毒载体与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4、pLV/helper-SL5共转染293FT细胞,收集病毒上清获得病毒颗粒,经浓缩后用4种不同浓度(0.0、5.0、10.0、20.0μl)的重组慢病毒瞬时感染大鼠CPCs,同时构建shRNA对照组,采用实时荧光PCR定量检测(qPCR)和免疫印迹法(Western blot)从基因和蛋白水平鉴定shRNA-β-catenin慢病毒载体对β-catenin的抑制效应.结果 成功构建shRNA-β-catenin重组慢病毒载体,shβ-catenin和shβ-catenin-对照的病毒滴度分别为5.05×107和4.34×107.体外实验显示,4种不同浓度重组慢病毒转染的CPCs中的β-catenin蛋白量随着转染病毒浓度的增加而减少,各组间差异有统计学意义(P＜0.05),转染shβ-catenin的CPCs表达的β-catenin mRNA的量明显低于shβ-catenin-对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本次包装的β-catenin重组慢病毒载体具有较高的感染效力,慢病毒载体的成功构建为研究β-catenin在CPCs向听觉毛细胞的分化机制提供了一定的技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张明		57	386	10.0	17.0
2	曾强		110	566	13.0	17.0
3	顾清		39	240	8.0	14.0
4	徐鹏	天津医科大学公共卫生学院	6	15	2.0	3.0
5	樊琳	天津医科大学公共卫生学院	6	5	1.0	2.0
6	孙靓	天津医科大学公共卫生学院	5	1	1.0	1.0
7	崔博	军事科学院军事医学研究院	3	1	1.0	1.0
8	余晓俊	军事科学院军事医学研究院	1	0	0.0	0.0