蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 何晓杰 叶尔保勒 王振宝 葛婷 阿斯喀·夏热甫汉 雷程红
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 蜜蜂幼虫芽胞杆菌 金属蛋白酶基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 49-54
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 5049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.05.009

摘要

克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础.用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1并转化至E.coli BL21 (DE3)感受态中.经不同的诱导时间、IPTG浓度诱导表达PLMP重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白.用目的蛋白对公兔进行4次免疫后,采集血清制备多抗.PCR扩增得到1 242 bp的PLMP基因片段;构建原核表达载体pGEX-4T-1-PLMP,经终浓度0.8 mmol/L IPTG、37℃诱导表达5h得到分子质量为70 ku目的蛋白;用目的蛋白免疫公兔得到的多抗经间接ELISA检测效价达到1:12 800,Western blot检测出现条带,证明所制备的多抗能够用于PLMP抗原的检测.研究结果构建了表达幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP的原核载体,获得了PLMP蛋白,制备了兔抗PLMP多克隆抗体,为建立幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷程红	新疆农业大学动物医学学院	60	123	6.0	7.0
2	葛婷	新疆农业大学动物医学学院	8	21	2.0	4.0