细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究

• 作者: 乔军 刘田莉 孟庆玲 才学鹏 王熙凤 贡莎莎 钟文强 陈英 黄运福
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 细粒棘球蚴 Eg HSP20抗原基因 克隆 表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医·畜牧
• 页码范围: 1547-1552
• 页数: 6页
• 分类号: S851.34+7.1.03
• 字数: 3878字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2018.7.036

摘要

[目的]本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性.[方法]根据GenBank中Eg HSP20蛋白基因cDNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆至pMD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体pET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析.[结果]Eg HSP20 cDNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸.该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39～ 53位和120～168位.SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 kDa的重组蛋白;Westem blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应.[结论]证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础.