流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立

• 作者: 何于雯 孟锦昕 朱建波 李华春 杨恒 杨振兴 肖雷 苗海生 高林
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流行性出血病病毒 多克隆抗体 竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1440-1450
• 页数: 11页
• 分类号: S854.43
• 字数: 6474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.013

摘要

为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法.结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12 μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50％;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RT-PCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致.结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法.