小鼠转录因子STAT1真核表达质粒的构建及生物学功能分析

• 作者: 刘宇卓 刘青涛 李银 杨婧 毕可然 章丽娇 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小鼠 信号转导子和转录激活子1 α干扰素
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 分类号: S852.3
• 字数: 4444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2019.01.020

摘要

本研究以小鼠组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)基因完整开放阅读框的碱基序列,然后将其克隆到真核表达载体pDsRed-N1中,构建pDsRed-N1-STAT1重组质粒.测序成功的真核质粒转染至BHK-21细胞,通过 α 干扰素(IFN-α)分子刺激,检测细胞中STAT1分子的活化状态与定位,最终通过坦布苏病毒刺激,荧光显微镜检测STAT1分子的细胞内定位.结果表明,小鼠的STAT1基因开放阅读框为2250 bp,编码749个氨基酸.同源性比对结果表明,小鼠STAT1与人、大鼠、猪、马等哺乳动物STAT1氨基酸序列的一致性分别为92％、97％、91％、91％.转染结果表明,构建的pDsRed-N1-STAT1真核表达质粒在BHK-21细胞中成功表达,无IFN-α 刺激时,红色荧光只在BHK-21细胞的细胞质中出现,而加入IFN-α 后,红色荧光则大多分布于细胞核内.用坦布苏病毒感染细胞后,红色荧光多分布于细胞质中.说明,构建的真核质粒pDsRed-N1-STAT1在哺乳动物细胞中能够正确表达融合蛋白质Red-STAT1,而且在IFN-α 刺激下,Red-STAT1可由细胞质向细胞核转运,同时发现,坦布苏病毒感染能够有效抑制STAT1分子的核转运.