分离小麦麦谷蛋白亚基的几个关键因素研究

• 作者: 刘永伟 吕孟雨 周硕 张翠绵 李春燕 杨帆 柴建芳 王海波 秘彩莉 董福双 赵和 马秀英
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 麦谷蛋白亚基 SDS-PAGE 优化 分离方法
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·生物技术
• 页码范围: 32-36
• 页数: 5页
• 分类号: S512.1
• 字数: 4518字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.201751710

摘要

小麦高分子量、低分子量麦谷蛋白亚基组成是影响小麦加工品质的重要因素,为了经济快速鉴定小麦高低分子量麦谷蛋白亚基组成,需要不断对提取和分离这些蛋白的方法进行优化.在Singh等提出的提取分离小麦高低分子量麦谷蛋白亚基方法的基础上,对其中涉及的单体蛋白去除、麦谷蛋白还原和烷化过程中使用的异丙醇浓度、烷化剂浓度以及烷化过程能否简化几个关键因素进行了深入研究.结果表明:在麦谷蛋白还原时,在10％ ～50％的异丙醇浓度范围内,不同浓度的异丙醇对高分子量麦谷蛋白亚基的提取效果没有差别,而低分子量麦谷蛋白亚基在用低浓度异丙醇提取时效果较差,随异丙醇浓度提高,提取效果逐渐提高,异丙醇浓度提高到30％时,提取效果达到最高,异丙醇浓度继续提高到50％,提取效果不再提高;使用30％和50％的异丙醇,去除单体蛋白的效果相同;把烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化,不同浓度(0.6％ ～1.4％)的烷化剂处理麦谷蛋白亚基的烷化效果相同,但烷化剂浓度为1.4％时电泳背景较重.优化后的方法为:在单体蛋白去除和麦谷蛋白还原时把异丙醇浓度由原来的50％降为30％,去掉单独的烷化步骤,把0.6％的烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化.优化后的方法不但减少了试剂用量,简化了提取步骤,还提高了电泳条带强度.