滑液支原体WVU1853株pdhA、pdhB的原核共表达及表达产物酶活性分析

• 作者: 丁小琴 伏小平 包世俊 武小椿 温峰琴 薛慧文 邢小勇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 滑液支原体(MS) 丙酮酸脱氢酶 共表达
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1673-1680
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.09.016

摘要

滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类重要的致病性支原体,MS感染可引起鸡(Gallus gallus)和火鸡(Meleagris gallopavo)的呼吸道病症以及关节炎和关节滑膜炎,导致蛋鸡产蛋量及鸡蛋品质下降、种蛋孵化率降低、肉鸡生长发育迟缓、饲料转化率低、胴体废弃率高等,给养鸡业造成重大经济损失.对滑液支原体的快速检测方法及良好免疫制剂的研究,可为其感染的快速诊断和有效预防提供支持.基于此,本研究参照GenBank中MS WVU1853株(GenBank No.CP011096.1)丙酮酸脱氢酶E1α亚基基因(pyruvate dehydrogenase E1αsubunit gene,pdhA)和β亚基基因(pdhB)序列及结构设计引物,应用PCR技术分别扩增获得二者及其以单碱基重叠方式连接的自然序列AB,采用overlap-PCR技术完成基因优化,将pdhA与pdhB以及AB分别克隆入原核表达载体pETduet-1和pET-28a(+),成功构建原核共表达质粒pETDuet-AB和pET-AB;并在分别转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后应用SDS-PAGE分析,进而检测其酶促活性.SDS-PAGE结果表明,MS WVU1853株pdhA和pdhB基因在两种质粒转化的大肠杆菌中均获表达,且表达产物相对分子量分别为43和36 kD,但pET-AB转化菌中两种蛋白均高效表达,而pETDuet-AB转化菌中α亚基表达效率明显较低;酶活性检测结果表明,两种转化菌诱导表达产物均具有酶促活性.本研究基于单核苷酸重叠构建了MSpdhA和pdhB基因的共表达载体并在大肠杆菌中获得高效表达,为pdhA和pdhB生物学功能的研究提供了良好的材料,为MS诊断方法的建立提供了可能的标识物,也为MS感染相关免疫制剂的研发提供了可能的疫苗候选,为两个基因的共表达提供了新的思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛慧文	甘肃农业大学动物医学院	45	105	5.0	7.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
3	温峰琴	甘肃农业大学动物医学院	36	45	4.0	5.0
4	伏小平	甘肃农业大学动物医学院	24	109	6.0	10.0
5	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
6	武小椿	甘肃农业大学动物医学院	11	1	1.0	1.0
7	丁小琴	甘肃农业大学动物医学院	9	20	3.0	4.0