新型H7N9流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用

• 作者: 刘梅芬 刘淑敏 王东方 王淑娟 班付国 谢彩华 赵明扬 赵雪丽 闫若潜 马震原
• 来源期刊: 中国病毒病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 新型H7N9病毒 流感病毒 双重荧光定量RT-PCR 方法建立 应用
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.16505/j.2095-0136.2018.0068

摘要

目的 建立特异敏感的荧光定量PCR (FQ-PCR)方法,用于新型H7N9流感病毒的快速检测.方法 针对GenBank中新型H7N9流感病毒(2016年以后)的血凝素基因和神经氨酸酶基因序列的保守区域分别设计两对特异性引物和两条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对2017年采集的临床疑似感染样品进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析.结果 本研究成功建立的新型H7N9 FQ-PCR检测方法在101～106拷贝/μl模板范围内有很好的线性关系,所得相关系数为0.999;对人工合成的H7和N9基因出现阳性扩增信号,但对鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H1N2、H3N2、H6N2、H9N2流感病毒等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.02％～0.05％;对H7和N9的最低检测模板浓度均为10拷贝/μl,比普通PCR方法的灵敏度高100倍;自30份疑似样品中检出4份阳性样品,与国家禽流感参考实验室复核结果一致.结论 本研究成功建立了H7N9流感病毒双重FQ-PCR检测方法,为禽相关临床样本的新型H7N9早期检测提供了特异、敏感、快速的方法.