结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定

• 作者: 任坤雨 余才涛 吕樵岚 李顺 王维斯 王雪岩 胡琪 陈勇 陈竹 韦一鸣
• 来源期刊: 热带病与寄生虫学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 热休克蛋白 HtpG 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 206-209,232
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2302.2019.04.005

摘要

目的 克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性.方法 采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒.重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通过镍柱纯化.Western blot鉴定表达蛋白,并使用HtpG重组蛋白经ELISA法检测肺结核患者血清特异性抗体水平.结果 成功构建了pET22b-HtpG重组质粒;在大肠埃希菌中表达出分子质量约73kDa的重组蛋白.Westem blot鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ELISA法检测肺结核患者血清中存在特异性抗HtpG抗体.结论 在大肠埃希菌内成功表达HtpG重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础.