重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化

• 作者: 吴敬 孙益荣 宿玲恰 黄燕
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Humicola insolens 角质酶 磷脂酶活性 高密度发酵
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 63-70
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190108

摘要

在采用前期已构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显.同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用.重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9.8U/mg(NPB水解比活力为1 047.6 U/mg),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象.在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平.优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0.8g/(L·h)的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788.0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0.2 g/(L·h)进行诱导的发酵策略(酶活2 233.0 U/ml)相比,提高幅度约为114.0％,发酵时间缩短40.0％.