猪德尔塔冠状病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 孙文超 方志超 曹亮 杜倩 汪伟 辛佳亮 郑敏 闭璟珊 韩知晓
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪德尔塔病毒 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 834-840
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0124

摘要

为建立猪德尔塔病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)快速灵敏的诊断方法,采用RT-PCR方法扩增猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)M基因,将M基因克隆到载体pEASY-Blunt Cloning Kit,以构建出的重组质粒作为标准阳性质粒,并以此为模板建立PDCoV M基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性等验证.结果,建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品模板在6.57×108～6.57×101copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-4.215;该方法特异性强,对PEDV和TGEV猪常见病原检测均无特异性扩增;可重复性良好,组内和组间变异系数均小于2％;灵敏度可达6.57×101copies/μ L;对临床样品的检测,本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的阳性检出率为5.0％.上述结果表明,本研究成功建立了检测PDCoV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,可实现对PDCoV的快速灵敏诊断.