猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 张莉 李富强 李秀丽 江珊 王利丽 路超 郑丽 鄢明华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪德尔塔冠状病毒 M基因 TaqMan探针 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 10-17
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4747字
• 语种: 中文

摘要

为建立一种快速、灵敏、准确的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)分子检测方法,根据PDCoV M基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了PDCoV M基因TaqMan荧光定量PCR检测方法.结果表明,该方法标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.998;敏感性好,最低可检测到10 co pies/μL的PD-CoV M基因标准品;特异性试验结果显示,该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及大肠埃希菌K88菌株均无交叉反应;重复性试验变异系数低于2％,表明重复性良好.对121份临床样本进行检测,阳性检出率为53.7％(65/121),随机选择10份阳性样品的扩增产物进行测序分析,进一步证实扩增产物中含有PDCoV.该方法具有敏感性高、特异性强、用时短和高通量等特点,适用于PDCoV的定量检测与分子流行病学调查,为PDCoV的准确定量及进一步研究奠定了基础.