RBSDV P7-2基因重组AcMNPV的构建及其对sf9细胞的致死作用

• 作者: 刘龙 孙丽英 王敦
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: RBSDV P7-2基因 重组AcMNPV 多角体形成速度 致死作用
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 植物科学
• 页码范围: 81-87
• 页数: 7页
• 分类号: S433.4|Q789|Q965
• 字数: 5158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201803035

摘要

[目的]为克服杆状病毒杀虫速度慢等固有缺点,首次尝试将异源病毒细胞凋亡诱导基因重组到昆虫杆状病毒中,以期为遗传修饰杆状病毒、提高杀虫效果提供新思路.[方法]将带有SV40终止子的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)多角体基因ph、AcMNPV ie-1启动子、在C端融合Flag标签的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)的P7-2基因依次插入到供体质粒pFastBac-HTB的多克隆位点.使用供体质粒pFastBac-HTB自身的启动子及ie-1启动子分别启动ph和P7-2基因的表达.通过转座的方法将ph、P7-2基因及启动子插入到bacmid bMON14272的多角体位置,获得重组bacmid Ac-P7-2,并通过Western blot检测P7-2基因的表达.转染sf9细胞后通过光学显微镜观察重组病毒多角体的形成并统计不同时间细胞死亡数量.通过TCID50的方法绘制病毒生长曲线.[结果]成功构建了P7-2基因重组AcMNPV bacmid Ac-P7-2,Western blot检测到P7-2蛋白可以正确表达.在转染sf9细胞48、72、96和120 h后,重组病毒vAc-P7-2细胞死亡数量显著高于野生型病毒vAc-WT,并发现重组病毒vAc-P7-2多角体形成并释放的速度也快于野生型病毒vAc-WT.病毒的生长曲线显示,在转染sf9细胞48、72、96和120 h后,vAc-P7-2的增殖速度显著快于vAc-WT.[结论]成功构建了多角体形成迅速的重组病毒vAc-P7-2,与野生型病毒vAc-WT相比其具有较快的增殖速度,对寄主细胞有较强致死作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王敦	西北农林科技大学植物保护学院	28	324	11.0	17.0
2	刘龙	西北农林科技大学植物保护学院	2	0	0.0	0.0
3	孙丽英	西北农林科技大学植物保护学院	3	4	1.0	2.0