犬腺病毒Ⅰ型和Ⅱ型TaqMan双重荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 乌吉斯古楞 关平原 刘东霞 宋庆庆 巨敏莹 张斌 王艳杰 韩宇
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 犬腺病毒I型 犬腺病毒Ⅱ型 TaqMan荧光定量PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 83-88
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3151字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.11.018

摘要

为鉴别检测犬腺病毒(CAV)I型和II型,根据GenBank中CAV-I和CAV-II型参考基因序列,设计合成1对通用引物和2条鉴别探针,建立了可鉴别检测CAV-I型和CAV-II型的双重荧光定量PCR检测方法.同时,对该方法进行了优化,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了试验,并与普通PCR检测方法进行样品检测符合率分析.特异性试验结果显示;本研究建立方法对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬冠状病毒均未产生扩增曲线.敏感性试验结果显示,建立方法对CAV-I的检测敏感度为100 copies/μL,对CAV-II的检测敏感度为10 copies/μL.重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于5％.临床样品检测对比结果显示,建立方法与普通PCR方法的符合率为95.12％.结果表明,本研究建立的TaqMan双重荧光定量PCR方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好等优点,可用于临床鉴别检测CAV-I和CAV-II型.本研究为CAV-I和CAV-II型感染的检测、鉴别以及流行病学调查提供了便捷快速的方法.