猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

• 作者: 丁培阳 周稳 张改平 李旭锋 李艳华 柴永笑 王垚 邢云瑞 郭军庆 金前跃 陈晓
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病毒 gE蛋白 毕赤酵母 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 133-139
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4
• 字数: 5639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.10.020

摘要

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒( PRV) gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株.通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定.同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验( IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定.结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的 gE 单克隆抗体,均可同时特异识别 PRV gE 蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3.综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体.