伪狂犬病毒的gE蛋白胞外区真核表达以及单克隆抗体制备

• 作者: 何琦琳 吴梦 杨希 葛良鹏 郎巧利 黄楠
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 伪狂犬病毒 gE 真核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 96-103
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0310

摘要

旨在构建gE基因胞外区真核表达载体,在HEK293F细胞中表达并纯化得到稳定的可溶性蛋白,并通过杂交瘤筛选获得表达gE蛋白的特异性单克隆抗体.生物信息学方法分析gE基因序列,构建gE胞外区真核表达载体pcDNA3.4-gE-6×His和pcDNA3.4-gE-mFc,通过瞬时转染的方法在HEK293F细胞中进行表达并进一步纯化.通过Western blot和SDS-PAGE鉴定和比较gE-6×His和gE-mFc融合蛋白表达情况.利用伪狂犬灭活全病毒免疫小鼠,电融合获得杂交瘤融合细胞,通过gE-mFc蛋白和IFA筛选出稳定且特异性结合gE蛋白的阳性杂交瘤细胞株.结果表明,成功构建pcDNA3.4-gE-6×His和pcDNA3.4-gE-mFc表达载体,表达纯化得到gE-6×His和gE-mFc可溶性蛋白.比较发现gE-6×His蛋白表达量低,稳定性差.而gE-mFc蛋白表达量高,稳定性好,一次性纯化后纯度可达85％.进一步利用gE-mFc筛选获得9株稳定性和特异性高的阳性杂交瘤细胞株.首次利用哺乳动物细胞表达系统表达并获得稳定的可溶性gE蛋白,并利用其筛选获得gE特异性单克隆杂交瘤细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛良鹏	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	22	58	4.0	6.0
2	杨希	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	3	0	0.0	0.0
3	郎巧利	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	3	0	0.0	0.0
4	黄楠	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	3	0	0.0	0.0
5	吴梦	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	7	6	1.0	2.0
6	何琦琳	重庆市畜牧科学院生物工程研究所	5	1	1.0	1.0