牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: Hussam Askar Mohamad 储岳峰 朱建勋 王方国 翟肖辉 郝华芳 陈胜利 颜新敏
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 p80基因 TaqMan探针 实时荧光定量PCR 特异性 敏感性
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: S85
• 字数: 3534字
• 语种: 中文

摘要

以牛支原体p80基因为靶基因,设计特异性引物与探针,优化反应体系,建立了牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR (TaqMan realtime PCR)检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性评估以及临床样本检测.结果 显示,特异性试验中,牛支原体2个菌株Cq值均小于18,其余13个非牛支原体菌株Cq值均大于36;敏感性试验中,最低可检3.89拷贝/μL靶DNA,是普通PCR的104倍(普通PCR 3.89×104拷贝/μL);重复性试验中,组内、组间重复的变异系数均小于1％;44份牛的临床样品利用TaqMan real time PCR检出6份阳性(阳性率为13.64％),分离培养鉴定检出7份阳性,普通PCR检测全部阴性.本研究建立了一种敏感、特异、稳定的牛支原体TaqMan real time PCR检测方法,可用于牛支原体的快速诊断和核酸定量检测.