单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析

• 作者: 吴清平 孙奇凡 张菊梅 王涓 程健恒 陈月桃 陈谋通
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 单增李斯特菌 LadR蛋白 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 58-65
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.10.010

摘要

利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体.通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证.本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白.通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白.在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR(IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜)中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍.本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈月桃		1	0	0.0	0.0
2	陈谋通		1	0	0.0	0.0
3	吴清平		1	0	0.0	0.0
4	张菊梅		1	0	0.0	0.0
5	程健恒		1	0	0.0	0.0
6	孙奇凡		1	0	0.0	0.0
7	王涓		1	0	0.0	0.0