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摘要:
目的 构建并筛选p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)基因沉默腺病毒载体,为进一步研究及应用p38MAPK基因沉默进行瘢痕增生基因治疗奠定基础.方法 依据兔p38MAPK基因的cDNA序列,设计并合成3对干扰序列,并对腺病毒进行包装.分别将以上3对双链DNA oligo退火后连入pDC316-ZsGreen-shRNA载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染HEK293A细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒栽体载染兔皮肤成纤维细胞后,运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测p38MAPK表达水平.结果 PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pDC316-ZsGreen-ShRNA载体;real-time PCR检测到各组慢病毒感染兔皮肤成纤维细胞后均可以明显抑制p38MAPK mRNA的表达(P<0.05).以AD-shRNA-P38MAPK-1组抑制效果最明显.结论 成功构建并筛选出针对p38MAPK的最有效RNAi腺病毒表达载体;构建的腺病毒载体可以抑制兔皮肤成纤维细胞p38MAPK的表达.
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文献信息
篇名 兔p38MAPK基因沉默腺病毒载体构建及体外干扰效率的鉴定
来源期刊 重庆医学 学科 医学
关键词 p38丝裂原活化蛋白激酶 基因沉默 腺病毒载体 瘢痕增生 成纤维细胞
年,卷(期) 2019,(9) 所属期刊栏目 论著·基础研究
研究方向 页码范围 1467-1471
页数 5页 分类号 R782.2
字数 3742字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-8348.2019.09.006
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p38丝裂原活化蛋白激酶
基因沉默
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瘢痕增生
成纤维细胞
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重庆医学
半月刊
1671-8348
50-1097/R
大16开
重庆市渝北区宝环路420号
78-27
1972
chi
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