结核分枝杆菌H37Rv新基因Rv2742克隆表达及纯化

• 作者: 孙金帅 常蕾 张瑶 徐平 戴二黑 李芊磷 武军驻 武舒佳 王红 赵加玲
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 结核分枝杆菌 新基因 原核表达 亲和纯化
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1771-1786
• 页数: 16页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.190092

摘要

Rv2742是本课题组前期基于蛋白质基因组学策略从结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis H37Rv中发现、鉴定的遗漏注释基因.文中旨在建立结核分枝杆菌H37Rv漏注释蛋白Rv2742的可溶性诱导表达、纯化体系,为进一步探索Rv2 742基因参与的生物学功能奠定基础.前期实验发现构建的pGEX-4T-2-Rv2742、pET-28a-Rv2 742、pET-32a-Rv2742及pMAL-c2X-Rv2 742原核表达载体均无法实现目的蛋白的诱导表达.但经密码子优化后,仅有pMAL-c2X-Rv2742载体能够实现目的蛋白的可溶性诱导表达.此外,通过比较不同宿主菌、温度及IPTG浓度对目的蛋白表达量的影响,发现目的蛋白在Rosetta (DE3)中,16℃及0.5 mmol/L IPTG诱导条件下表达量最高.直链淀粉树脂(Amylose resin)亲和层析柱纯化获得较纯的产物,经LC-MS/MS验证确认是Rv2742融合蛋白肽段序列.成功获得结核分枝杆菌H37Rv新基因Rv2 742的重组蛋白,可进一步开展其潜在相互作用及免疫原性研究工作.