荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究

• 作者: 余倩 张曾娣 张玉宇 朱伟云 黄赞
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 胆囊收缩素(CCK) 荧光素酶 大肠杆菌敲除株
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1133-1140
• 页数: 8页
• 分类号: R593.22
• 字数: 6746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201810007

摘要

[目的]本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型.[方法]利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,获得STC-1/CCK-Luc细胞系.用大肠杆菌基因敲除株培养液上清处理上述细胞,检测荧光素酶活性,确定可影响CCK表达的大肠杆菌基因及代谢产物.使用纯化的代谢产物处理STC-1细胞及肠道类器官,通过Western blot及免疫荧光法检测CCK表达水平的变化.[结果]酶切鉴定及DNA测序表明慢病毒载体构建成功,荧光素酶活性检测发现大肠杆菌ΔSapD株菌液上清可显著抑制荧光素酶的表达.敲除SapD基因可以使培养液中腐胺水平下降,而腐胺可以上调STC-1细胞及肠道类器官中CCK的表达.[结论]成功构建了能够体外检测CCK表达的细胞系,筛选出1个能够调控CCK表达的大肠杆菌突变体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张曾娣		2	0	0.0	0.0