赤羽病病毒Gc405aa-480aa肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定

• 作者: 张俊哲 王建华 王玉玲 肖妍 赵丹
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 赤羽病病毒 Gc蛋白 重组肽段 原核表达 纯化 抗原性鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 79-83
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.03.018

摘要

为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa-480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体pET-Gc405aa-480aa,转化表达菌株BL21 (DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达.将重组rHis-Gc405aa-480aa肽段,通过Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Westem-bloting和ELISA分析其抗原性.SDS-PAGE显示,重组rHis-Gc405aa-480aa肽段以完全可溶性形式在大肠杆菌中得到高效表达;用Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化,获得了较高纯度的重组rHis-Gc405aa-480aa肽段;Western-blotting显示,该重组肽段对赤羽病病毒阳性血清具有很强的反应原性.本研究表达、纯化和鉴定了具有强抗原性的重组rHis-Gc405aa-480aa肽段,为进一步开展Gc蛋白单克隆抗体制备、B细胞表位鉴定和诊断试剂研制奠定了基础.