赤羽病病毒核衣壳蛋白基因的表达纯化及活性鉴定

• 作者: 冉多良 吴东来 孟庆文 李少英
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 赤羽病病毒 核衣壳蛋白 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 937-941
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 4422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.12.003

摘要

为获得赤羽病病毒(Akabane virus, AKAV)核衣壳蛋白重组抗原,经RT-PCR扩增了OBE-1株的S节段,将其插入到pMD 18-T载体,然后用带有酶切位点的引物从该重组载体亚克隆出表达核衣壳蛋白的N基因,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后与同样处理的表达载体pET-28a(+)进行连接,转化感受态细胞BL21(DE3).将筛选出的阳性克隆进行测序、IPTG诱导表达和融合蛋白纯化及活性鉴定.结果表明,N基因含有1个全长702 bp的ORF,编码233个氨基酸,通过SDS-PAGE和Western-blotting分析,证实重组菌株可高效表达有免疫活性的分子质量约27 ku的可溶性融合蛋白,用薄层扫描仪分析,其最高表达量占可溶性菌体蛋白总量的58.5%.工程菌经超声波裂解高速离心后,上清液在ProBondTM Purification System(含Ni2+)天然状态下纯化,可获得高纯度的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴东来	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	25	152	8.0	10.0
2	李少英	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	6	34	4.0	5.0
6	冉多良	新疆农业大学动物医学院	125	564	11.0	18.0
7	孟庆文	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所	23	82	6.0	8.0