利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除猪肠上皮细胞(IPEC-J2) ace2基因及其功能分析

• 作者: 刘颖 张源淑 王凯 王换换 纪晓霞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 血管紧张素转移酶2基因(ace2) CRISPR/Cas 9 猪肠上皮细胞(IPEC-J2)
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 656-665
• 页数: 10页
• 分类号: S852.23
• 字数: 6167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.04.009

摘要

关于血管紧张素转移酶2 (angiotensin converting enzyme 2,ACE2)的研究目前主要集中于啮齿类动物和人类(Homo sapiens),猪(Sus scrofa domesticus)方面的资料较少.ACE2在不同组织器官中良好的抗炎、抗损伤作用已被广泛认可,但在肠道中的作用尚不明确.本研究拟利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cell,IPEC-J2) ace2基因敲除方法,探究ace2缺失对细胞炎性损伤的影响.首先通过Western blot和免疫荧光染色方法证实所选取的IPEC-J2细胞有ACE2蛋白表达;然后以猪ace2基因为敲除靶点,设计合成3对单导向RNA (single guide RNA,sgRNA),并插入含有Cas9骨架的pX330质粒,构建ace2基因打靶载体pX3 30-ace2-1、pX330-ace2-2和pX330-ace2-3.将测序正确的重组质粒pX330-ace2-2转染至IPEC-J2细胞,Western blot和免疫荧光染色结果显示ACE2蛋白表达缺失;以酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测ace2敲除细胞的炎性因子水平,结果显示,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理组的促炎因子白介素(interleukin,IL)-1β和IL-8显著升高(P＜0.01)、抗炎因子IL-10显著降低(P＜0.05),细胞炎性损伤加剧,提示肠道ACE2具有一定的抗炎作用.本研究利用CRISPR/Cas9系统建立了靶向敲除猪肠上皮细胞ace2基因的方法,并初步探讨了ACE2在猪肠道的抗炎作用,为深入开展ACE2相关功能和作用机制研究提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张源淑	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	99	589	13.0	18.0
2	王凯	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	112	2075	25.0	42.0
3	王换换	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	7	16	2.0	3.0
4	刘颖	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	14	61	5.0	7.0
5	纪晓霞	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	8	4	1.0	1.0