靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建

• 作者: 刘德武 吴珍芳 彭俏丽 李崇 李紫聪 杨晓峰 蒋璐蔓
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 生物学
• 关键词: 性反转 CRISPR/Cas9 Rbmy 小鼠
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: Q38
• 字数: 6347字
• 语种: 中文

摘要

性反转是指动物表现的性别特征与其应有的性别相反的现象.性反转小鼠可作为动物模型研究哺乳动物性别分化机制、性别控制技术以及研究人类性别连锁疾病发病机理和防治方法.已有研究证明,在胚胎期敲除雄性小鼠的Y染色体将获得XO基因型的性反转小鼠.本研究设计了6个不同的sgRNA,使共能介导Cas9蛋白作用于小鼠Y染色体上的多拷贝基因-Rbmy(RNA-binding motif gene),通过比较不同的sgRNA介导Cas9对靶序列的切割效率,最终筛选出一条能够高效介导Cas9靶向Rbmy基因的sgRNA6,该gRNA6在体外切割效率达到100％,细胞内切割突变效率为15.4％,利用该sgRNA6构建了靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体.利用该载体转染小鼠雄性睾丸间质瘤细胞,成功获得了XO基因型的单细胞克隆团.本研究所构建的靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体可用于小鼠胚胎注射,为获得Y染色体敲除的XO型性反转小鼠模型提供基础.