贝莱斯芽孢杆菌的内切葡聚糖酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

• 作者: 吴兴利 张芳毓 徐海燕 王春凤 谷巍 钱爱东 闫晓刚 陈龙
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 内切葡聚糖酶 贝莱斯芽孢杆菌 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 100-108
• 页数: 9页
• 分类号: S476
• 字数: 7356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20181022-04

摘要

本实验利用PCR方法扩增1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)源的内切葡聚糖酶基因(CMCase),插入到pET32a(+)中构建重组表达大肠杆菌系统,对重组内切葡聚糖酶基因进行生物信息学分析以及酶学性质研究.结果 表明:内切葡聚糖酶由499个氨基酸组成,预测分子量为55.02 ku,最大开放阅读框ORF约为1500bp.经诱导表达优化后,培养上清中可检测到内切葡聚糖酶酶活力为5.81 IU/mL,菌体中为1.61 IU/mL,诱导后原菌液直接超声破碎处理可达7.41 IU/mL,其酶活力为野生菌株的2.3倍.重组内切葡聚糖酶具有典型内切纤维素酶的特征,其最适酶反应温度和pH分别为50℃和6,在60℃条件下放置1h相对剩余酶活力可保持在70％以上,在pH 6～10范围内可保持90％以上.Na+、Mg2+可以促进重组内切葡聚糖酶酶活力,而C02+、Hg2+、Fe2+等金属离子以及表面活性剂SDS则具有较强的抑制作用.由此可见,本实验在大肠杆菌BL21 (DE3)中成功表达了内切葡聚糖酶,且该酶主要进行分泌表达,具有一定的耐热性和良好的pH稳定性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱爱东	吉林农业大学动物科学技术学院	283	1216	15.0	21.0
2	谷巍		324	1392	15.0	24.0
3	王春凤	吉林农业大学动物科学技术学院	134	596	12.0	16.0
4	徐海燕		141	749	14.0	22.0