广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析

• 作者: 刘彦婷 周璇璇 唐云 李俊仁 王小兵 詹若挺 钟李婷 陈秀珍 陈立凯
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 广藿香 蛋白表达 广藿香醇 互作蛋白 茉莉酸甲酯
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 10-15
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0475

摘要

对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白.利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白.利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定.结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白.利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白.