鸭腺病毒3型Hexon基因的克隆及SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 万春和 傅光华 刘荣昌 施少华 朱春华 程龙飞 陈珍 陈翠腾 黄瑜
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭腺病毒3型 Hexon基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1104-1112
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.11

摘要

鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)是近年来我国新发鸭源禽腺病毒.本试验根据NCBI数据库中DAdV-3 Hexon基因特征,设计特异性引物,获得番鸭源DAdV-3福建株(命名为W1FJ株)Hexon基因全长,明确其分子特征,并基于此建立检测DAdV-3的SYBR GreenI实时荧光定量PCR方法.结果 表明,克隆的W1FJ株Hexon基因全长为2 814 bp,编码937个氨基酸,和DAdV-3(CH-GD-12-2014株)核苷酸同源性为100％,但和鸭源禽腺病毒B型(也称鸭腺病毒2型,DAdV-2,GR株)核苷酸同源性仅为76.6％.Hexon蛋白遗传进化分析表明,W1H株和CH-GD-12-2014株在遗传进化上形成一个独立的分支,与鸭源禽腺病毒B型和鹅源禽腺病毒A型(goose aviadenovirus A)在遗传进化上明显不同,建议将其命名为鸭源禽腺病毒C型(duck aviadenovirus C).建立的检测DAdV3的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,灵敏度高,最低检测限为61拷贝/μL;特异性强,和鸭群常见传染病病原均无交叉反应,扩增产物的熔解曲线只出现1个特异性单峰,Tm值为(81.48±0.25)℃;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.49％～ 1.64％和0.67％～2.40％.本试验为DAdV-3的科学分类和后续开展DAdV-3感染的流行病学调查及致病机理研究奠定基础.