TTF-1基因过表达慢病毒重组载体的构建及TTF-1过表达A549细胞系的建立

• 作者: 于亮 宋旭洋 李长清 韩育宁 马云帆
• 来源期刊: 宁夏医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲状腺转录因子-1 慢病毒 肺腺癌 A549细胞系
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 97-99
• 页数: 3页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13621/j.1001-5949.2019.02.0097

摘要

目的 构建甲状腺转录因子-1(TTF-1)基因过表达慢病毒重组载体并感染人肺腺癌A549细胞株,建立TTF-1基因过表达的A549细胞系,为进一步研究TTF-1在肺腺癌中的作用机制奠定基础.方法 采用PCR拼接TTF-1的cDNA寡核苷酸序列,连入pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro,转化至感受态细胞DH-5α,测序鉴定;将携带TTF-1基因的慢病毒过表达载体转染至293T细胞,经包装产生慢病毒,测定病毒滴度,并感染A549细胞,构建稳定表达TTF-1基因的肺腺癌A549细胞系.结果 测序结果显示,TTF-1基因过表达慢病毒载体pCDH-CMV-TTF1-EF1-CopGFP-T2A-puro构建成功,测序结果正确;经包装所得病毒上清液滴度为6×107 TU/mL,稳定转染的细胞系在荧光显微镜下可见GFP表达;PCR结果显示,A549细胞转染组中TTF-1基因表达量比未转染组提高了381倍.结论 成功克隆、扩增TTF-1基因,并建立其慢病毒表达系统,构建了稳定过表达TTF-1基因的人肺腺癌A549细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于亮	宁夏医科大学总医院普胸外科	18	29	3.0	5.0
2	韩育宁	宁夏医科大学总医院普胸外科	30	53	4.0	5.0
3	马云帆	宁夏医科大学总医院普胸外科	12	13	3.0	3.0
4	李长清	山东省临沂市中心医院胸外科	1	0	0.0	0.0
5	宋旭洋	宁夏医科大学总医院普胸外科	1	0	0.0	0.0