柯萨奇病毒B组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 井申荣 庞冉 张同禹 金维维 陈伟
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 柯萨奇病毒B组5型 VP1蛋白 多克隆抗体 免疫组化
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 463-466
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3507字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.04.015

摘要

目的:原核表达柯萨奇病毒B组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测.方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒B组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白.用HisTrap HP亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化的目的蛋白为抗原,免疫雄性SD大鼠获得VP1蛋白多克隆抗体血清,ELISA测定该抗体的效价,微量中和实验测定抗体的中和活性,Western blot检测抗体的特异性,免疫组化检测抗体对组织中抗原的识别.结果:成功构建了VP1-pET-28a重组载体,并且在BL21细胞中成功诱导表达,亲和层析柱纯化后蛋白纯度大于90％.ELISA测得抗体的效价为1:128000,微量中和实验显示抗体没有中和活性,Western blot分析显示抗体能与CVA16和EV71交叉反应,免疫组化实验表明抗体能够识别组织中的CVB5抗原.结论:本研究成功制备了CVB5 VP1蛋白的高效价的多克隆抗体,为CVB5病毒疫苗和病毒诊断的研发提供了有效的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	昆明理工大学医学院	55	304	10.0	15.0
2	井申荣	昆明理工大学医学院	89	229	8.0	12.0
3	金维维	昆明理工大学医学院	2	2	1.0	1.0
4	庞冉	昆明理工大学医学院	2	2	1.0	1.0
5	张同禹	昆明理工大学医学院	1	2	1.0	1.0