柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白3C表达纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 井敏敏 井申荣 仉秋实 苑荣亮
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 柯萨奇病毒 非结构蛋白 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 82-86
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3429字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2016.02.005

摘要

目的 表达和纯化柯萨奇病毒(CVB5)非结构蛋白3C,免疫雄性大鼠制备多克隆抗体.方法 通过酶切质粒获取3C基因序列,构建到原核表达系统大肠埃希菌中诱导表达重组的3C蛋白,使用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色法(BSA)对重组蛋白的纯度与浓度进行分析,重组的3C蛋白作为抗原,免疫雄性SPF级大鼠获得多抗血清,用ELISA测定抗体效价并Western印迹检测抗体特异性,用该抗体检测病毒在细胞内的复制.结果 构建了重组表达载体命名为3C-pET-28a,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达重组3C蛋白.ELISA测定制备的多抗血清效价为1:500 000,Western印迹检测在EV71、CVA16中都有交叉反应,并确定病毒感染细胞后24 h开始复制.结论 实验成功地利用原核表达系统表达柯萨奇病毒非结构蛋白3C,为进一步研究柯萨奇病毒的感染机理以及疫苗制备提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	井申荣	昆明理工大学医学院	89	229	8.0	12.0
2	井敏敏	昆明理工大学医学院	3	3	1.0	1.0
3	苑荣亮	昆明理工大学医学院	5	11	2.0	3.0
4	仉秋实	昆明理工大学医学院	3	4	1.0	2.0