pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA真核表达干扰载体构建与鉴定

• 作者: 朱家佳 龙鼎新
• 来源期刊: 贵州医药
• 学科: 生物学
• 关键词: CAPNS1 RNA干扰 pYr-Lvsh 载体构建
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 675-678
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3083字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用RNA干扰技术构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体,并在Hela细胞中鉴定.方法 针对目的基因人的CAPNS1基因(NM_001749),设计shRNA序列,以pYr-Lvsh为载体,构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体;干扰载体转染Hela细胞,利用荧光定量PCR检测CAPNS1 mRNA表达情况;荧光分光光度检测calpain活性;Western-blot检测相关蛋白含量.结果 结果发现,载体酶切及测序结果显示pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体构建成功;qPCR显示与对照组相比,shRNA组CAPNS1表达受到抑制,CAPNS1-sh的干扰效率为50.30％;calpain活性检测显示shRNA组calpain活性下降并且CAPNS1、calpain1和calpain2蛋白含量下降.结论 结果表明pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体成功构建,并在Hela细胞中有效干扰CAPNS1表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙鼎新	南华大学公共卫生学院	76	328	11.0	15.0
2	朱家佳	南华大学公共卫生学院	6	0	0.0	0.0