BVDV TC株EO基因克隆和序列分析及SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 付强 冉多良 史慧君 姚刚 李祯 李胜男 田瑞鑫 胡新艳 赵新艳 郭妍婷 陈俊贞
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 EO基因 B细胞抗原表位 生物信息学分析 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 83-86,92,175-176
• 页数: 1页
• 分类号: S852.65+3|Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.02.0271

摘要

为了建立一种基于牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)囊膜蛋白 EO基因的实时荧光定量 PCR检测方法,试验根据GenBank数据库中 BVDV EO基因序列设计特异性引物,扩增 BVDV新疆塔城分离株TC株的 EO基因并克隆至 pBM23载体中并测序鉴定:根据测序结果对 EO基因的基本理化性质、B细胞抗原表位、二级结构、三级结构等进行生物信息学分析;以 pBM23-EO为标准质粒,10倍梯度稀释后建立实时荧光定量 PCR标准曲线.结果表明:BVDV TC株 EO基因长度为 681 bp,与已发表的 BVDV1 V070株EO基因氨基酸同源性为 97.36％;生物信息学分析表明,EO蛋白为稳定的亲水性蛋白,该蛋白有4个 0-糖基化位点和 19个磷酸化位点,11个潜在的 B细胞抗原表位.二级结构以无规则卷曲为主,并用 SWISS-MODEL构建出 EO蛋白的三级结构;成功绘制出检测 BVDV TC株 EO基因荧光定量 PCR的标准曲线,相关系数(R2)＞0.998 0.说明成功建立了基于BVDV EO基因的实时定量 PCR的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚刚	新疆农业大学动物医学学院	141	547	13.0	17.0
2	冉多良	新疆农业大学动物医学学院	125	564	11.0	18.0
3	付强	新疆农业大学动物医学学院	14	13	2.0	3.0
4	史慧君	新疆农业大学动物医学学院	16	8	1.0	1.0
5	李胜男	新疆农业大学动物医学学院	5	1	1.0	1.0
6	郭妍婷	新疆农业大学动物医学学院	3	0	0.0	0.0
7	田瑞鑫	新疆农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
8	胡新艳	新疆农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
9	李祯	新疆农业大学动物医学学院	2	0	0.0	0.0
10	陈俊贞	新疆农业大学动物医学学院	3	0	0.0	0.0
11	赵新艳	新疆农业大学动物医学学院	3	0	0.0	0.0