美洲大蠊抗肝纤维化活性部位酶解制备工艺的水解蛋白酶筛选

• 作者: 杨华蕊 杨永寿 肖培云
• 来源期刊: 中国药房
• 学科: 医学
• 关键词: 美洲大蠊 肝纤维化 水解蛋白酶 酶解工艺 水解度 分离纯化 HSC-T6细胞
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 中药与民族药
• 页码范围: 1953-1958
• 页数: 6页
• 分类号: R91
• 字数: 6221字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.14.17

摘要

目的:优选美洲大蠊脱脂膏酶解工艺的最佳水解酶,以提高美洲大蠊中抗肝纤维化活性部位的提取得率和活性.方法:以美洲大蠊脱脂膏为对照,采用茚三酮法和福林酚法考察胰蛋白酶(TR)、胃蛋白酶(PE)、碱性蛋白酶(AL)、木瓜蛋白酶(PA)、中性蛋白酶(NE)对脱脂膏的水解度;采用大孔树脂分离纯化法,分别以50％、60％、70％、95％乙醇为洗脱溶剂,考察各酶解液不同溶剂洗脱部位的得率;借助大鼠肝星状细胞HSC-T6体外抑制试验,考察各酶解液洗脱部位的抗肝纤维化活性.结果:PA、NE对美洲大蠊脱脂膏的水解度分别为14.15％、15.70％,具有较强的酶解能力.PA、NE、AL酶解液的95％乙醇洗脱部位得率分别为(0.73±0.04)％、(0.65±0.01)％、(0.64±0.05)％,分别较不加酶的脱脂膏提高了30.36％、16.07％、14.29％.细胞体外抑制试验结果显示,各酶解液分离纯化所得的50％、60％、70％乙醇洗脱部位对HSC-T6细胞抑制率较低或呈现促增长现象;其95％乙醇洗脱部位对HSC-T6细胞的抑制率总体均在20％以上,其中PA、NE酶解液分离纯化所得的95％乙醇洗脱部位作用24～72 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为94.5～112.3、117.1～120.0μg/mL,总体小于不加酶的脱脂膏的IC50(116.1～123.0μg/mL).结论:综合水解度、纯化洗脱部位得率及对HSC-T6细胞的体外抑制活性3个指标,确定PA为美洲大蠊脱脂膏抗肝纤维化活性部位酶解工艺的最佳水解酶;NE、AL效果次之;PE、TR效果较差,不适于该酶解工艺.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨永寿		15	57	4.0	7.0
2	肖培云	大理大学药学与化学学院	23	47	3.0	6.0
3	杨华蕊	大理大学药学与化学学院	3	1	1.0	1.0