大肠杆菌UvrB基因的克隆、表达与功能研究

• 作者: 叶依杨 张梦 方佳炜 杨一鸣 王中山
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: UvrB DNA损伤 切除修复 蛋白表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.01.0002

摘要

[目的]在大肠杆菌表达系统表达UvrB蛋白,优化其表达和纯化的条件,并初步研究其对抗紫外线伤害的功能.[方法]克隆大肠杆菌MG1655菌株UvrB编码序列,采用酶切连接的方法构建表达载体pWaldo-GFP-UvrB,并转入BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白质表达,采用Ni-NTA亲和层析以及分子筛层析的方法纯化蛋白质,采用紫外光刺激的方法研究其细胞内功能.[结果]成功构建UvrB表达载体,获得UvrB在BL21(DE3)中重组菌株,其表达条件为22℃,0.2 mmol/L IPTG诱导20 h,UvrB以可溶蛋白的形式存在.SDS-PAGE结果显示UvrB蛋白质分子量约76 kDa与预期相符;经纯化后UvrB蛋白质得率约为0.6 mg/L培养基,纯度＞85％,为其进一步研究奠定了基础.[结论]研究克隆并构建了大肠杆菌UvrB蛋白的原核表达体系,优化了其纯化方案,得到纯度＞85％的可溶UvrB蛋白质,为进一步研究UvrB蛋白质功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中山		6	3	1.0	1.0
2	张梦		4	3	1.0	1.0
3	方佳炜		3	0	0.0	0.0
4	杨一鸣		1	0	0.0	0.0
5	叶依杨		1	0	0.0	0.0