利用TALEN系统对兔进行Tiki1基因敲除

• 作者: 刘朝明 吴彩霞 张全军 樊娜娜 欧阳振 赖良学 赵宇 颜泉梅
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔 TALEN Tiki1基因 囊胚 基因敲除 基因修饰
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: S829.1
• 字数: 5148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201908011

摘要

[目的]利用转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)系统获得Tiki1基因敲除的兔模型,为研究Tiki1对动物早期发育作用机理提供兔源的动物模型.[方法]基于TALEN系统设计了靶向兔Tiki1基因的打靶载体,分别将10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞质中,然后收集发育至囊胚期的胚胎,鉴定囊胚率和基因修饰效率,通过测序检验囊胚的基因突变.为了进一步获得Tiki1基因敲除兔,后续将50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17个原核期的家兔受精卵胞质中,将受精卵分别移植到2只受体兔体内.[结果]注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(64％)与注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(57％)差异不大,但注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(100％)显著高于注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(14.3％).测序结果表明,Tiki1基因的突变范围从1到28 bp缺失不等.经过胚胎移植共生出3只仔兔,其中有2只兔子能检测到基因突变.[结论]所建立的TALEN技术体系可以对家兔Tiki1基因进行高效的敲除.