SIRT2稳定敲除细胞系的建立及对组蛋白修饰的影响

• 作者: 刘长云 李雪 王珊 裴培
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SIRT2基因 HEK293细胞 CRISPR/Cas9系统 基因敲除 组蛋白修饰
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 54-58,113
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4124字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2020.02.013

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除SIRT2基因的HEK293细胞系,研究其对组蛋白不同位点的修饰情况.方法 构建lentiCRISPR v2-sgRNA SIRT2敲除质粒,通过慢病毒包装,感染HEK293细胞,嘌呤霉素筛选出阳性克隆.对筛选的细胞株进行T7E1验证,来验证所设计的sgRNA的有效性.应用蛋白质免疫印迹检测SIRT2蛋白水平,筛选得到SIRT2稳定敲除细胞系.使用蛋白质免疫印迹的方法在蛋白水平验证SIRT2对组蛋白乙酰化、甲基化的影响.结果 通过测序证明lentiC-RISPR v2-sgRNA SIRT2敲除质粒正确,T7E1验证了所构建的质粒具有良好的CRISPR/Cas9活性,使基因组碱基发生突变.蛋白质免疫印迹证明SIRT2敲除细胞系中SIRT2表达显著降低.在CRISPR/Cas9系统敲除SIRT2的HEK293细胞中,组蛋白H4乙酰化在赖氨酸第16位(H4K16ac)表达显著升高,组蛋白H4乙酰化在赖氨酸第5位(H4K5ac)表达下降,组蛋白H3二甲基化在赖氨酸第79位(H3 K79 me2)表达升高.结论 获得SIRT2稳定敲除细胞系,便于后续SIRT2对组蛋白修饰功能的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘长云		79	266	8.0	10.0
2	李雪		17	23	3.0	4.0
3	王珊		5	1	1.0	1.0
4	裴培		5	1	1.0	1.0