CRISPR/Cas9系统靶向敲除多溴蛋白1基因对肝癌细胞功能的影响

• 作者: 宋金鸽 焦宇辰
• 来源期刊: 临床内科杂志
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 多溴蛋白1 Huh7细胞系
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 临床基础研究
• 页码范围: 300-304
• 页数: 5页
• 字数: 5894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9057.2020.04.017

摘要

目的 探讨应用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)系统靶向敲除多溴蛋白1(PBRM1)基因对肝癌细胞功能的影响.方法 应用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Huh7细胞的PBRM1基因.采用Sanger测序和蛋白质印迹法(Western blot)检测基因敲除情况.基于转录本测序(RNA-seq)结果,对Huh7敲除(KO)细胞株与Huh7野生(WT)细胞系差异表达基因进行功能富集.采用流式细胞术分析细胞周期的改变.通过CCK-8法和克隆形成实验研究细胞增殖情况.采用不同浓度的γ-干扰素(IFN-γ)处理Huh7-KO细胞株和Huh7-WT细胞系,验证GO富集中IFN-γ应答通路的改变.结果 成功构建PBRM1基因敲除的Huh7细胞株.Huh7-KO细胞株的生长曲线和克隆形成率均显著慢于Huh7-WT细胞系(P<0.0001).Huh7-KO细胞株中下调基因主要与细胞周期相关,上调基因主要与免疫应答相关.Huh7-KO细胞株处于G1期的细胞比例明显高于Huh7-WT细胞系(P=0.0166),而处于S期的细胞比例明显低于Huh7-WT细胞系(P=0.0002).浓度为1000 U/ml的IFN-γ对Huh7-KO细胞株组的细胞抑制作用明显高于Huh7-WT细胞系组(P=0.0091).结论 在Huh7肝癌细胞株中敲除PBRM1可以导致G1/S阻滞从而抑制细胞增殖.高浓度IFN-γ可以更加有效地杀伤PBRM1缺失的肿瘤细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋金鸽	北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
2	焦宇辰	北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0