斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系的构建

• 作者: 付贵芳 印遇龙 曾婷 杜涵 谢华平 谢缤灵
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 斑马鱼 microRNA CRISPR/Cas9 miR-196a-1基因
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 176-182
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2020.02.012

摘要

microRNA (miRNA)是一类内生的、长度约为19 ～ 23个核苷酸的非编码RNA,通过影响mRNA的稳定性和翻译,来参与基因表达的转录后调控.生物信息学分析表明该基因在各个物种中高度保守.为了阐明该基因在肠道发育中的作用,本文利用Cloning free CRISPR/Cas9基因编辑技术构建miR-196a-1基因敲除的斑马鱼品系.首先通过分析软件筛选出斑马鱼miR-196a-1基因的两个敲除位点,两个敲除位点相隔132 bp,利用PCR技术扩增miR-196a-1的向导DNA,再以向导DNA为模板转录得到miR-196a-1的sgRNA,将miR-196a-1基因的sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎1细胞期胚胎中.斑马鱼胚胎发育到36 hpf后进行基因编辑的有效性检测,研究结果显示,miR-196a-1基因出现102 bp碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对miR-196a-1基因的敲除有效.对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系,为研究miR-196a-1在肠道发育中的作用奠定了基础.