Lager酵母中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建

• 作者: 刘春凤 张可心 李崎 李梦琦 王金晶 郑飞云 钮成拓
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 工学
• 关键词: Lager酵母 CRISPR-Cas9 基因敲除 S.pasteurianus
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 36-44,96
• 页数: 10页
• 分类号: TS262.5
• 字数: 4480字
• 语种: 中文

摘要

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术在Lager型啤酒酵母(Saccharomyces pasteurianus)中建立CRISPR-Cas9基因敲除系统.将质粒pMY中毕赤酵母基因表达系统中常用GAP启动子替换为酿酒酵母基因表达系统中常用PGK1启动子,增强外源基因表达量.设计酿酒酵母(S.cerevisiae)基因组及真贝酵母(S.eubayanus)基因组中目的基因TRP1小向导RNA.增加向导RNA结构中锤头状核酶和肝炎三角洲病毒核酶结构,提高gRNA转录水平.Lager型啤酒酵母Pilsner中TRP1基因被敲除,成功构建Lager型啤酒酵母中CRISPR-Cas9基因敲除系统.