犬圆环病毒Cap蛋白的生物信息学分析及原核表达

• 作者: 孙文超 庄忻雨 张赫 易驰喆 曹亮 杜倩 汪伟 辛佳亮 郑敏 金宁一 闭璟珊 韩知晓 鲁会军
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬圆环病毒 Cap蛋白 生物信息学 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 86-91
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 4308字
• 语种: 中文

摘要

犬圆环病毒(CanineCV)是近年被发现的圆环病毒属新成员,获取CaineCV Cap蛋白,为研究Cap蛋白的功能以及抗原表位奠定了基础.本研究以CaineCV GX2017株基因组作为模板,使用PCR方法扩增出Cap蛋白的基因序列,对其进行生物信息学分析,并克隆至pET-28a原,进行原核表达.结果表明:GX2017的N端2～26位氨基酸存在一个核定位信号,同时含有3个B细胞表位(aa7～aa14;aa150～aa174;aa233～aa253);第134位氨基酸为N-糖基化位点,第169和第238位氨基酸为O-型糖基化位点;进化分析表明,本研究的CanineCV Cap蛋白基因序列与欧美株同源性较低,且处在不同的分支;SDS-PAGE结果显示,重组Cap蛋白在E.coli BL21(DE3)中不能正确表达,切除了NLS的d(1-26)Cap蛋白能在E.coli BL21(DE3)中大量表达;Western blot分析表明,该重组蛋白能与Anti-His标签抗体发生特异性反应.本研究成功构建了pET-d(1-26)Cap重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中获得高水平表达,为进一步制备Cap蛋白的抗体奠定了基础.