人ALOX5 AP基因启动子的克隆及生物信息学分析

• 作者: 吴从平 姜恩德 徐晟林 耿学峰 臧丽玉 赵宝昌
• 来源期刊: 泰山医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: ALOX5AP基因 脑卒中 启动子 转录调控
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 183-188
• 页数: 6页
• 分类号: R394.8
• 字数: 3710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7115.2020.03.005

摘要

目的 克隆人ALOX5AP(Arachidonate 5-lipoxygenase activating protein)基因启动子区域并构建荧光素酶报告基因表达载体,运用生物信息学分析该序列并预测启动子候选区及转录因子结合位点.方法 PCR扩增ALOX5AP基因转录起始点上游2000 bp的片段,将其连接至pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因重组质粒,MluⅠ与HindⅢ双酶切及测序鉴定.采用Promoter 2.0、CpGPlot、AliBaba 2.1等软件对启动子及转录因子结合位点进行预测与分析.结果 构建了含有ALOX5AP基因启动子序列的重组质粒,双酶切与测序验证构建成功.生物信息学分析表明ALOX5AP基因转录起始点上游2000 bp有3个启动子候选区,未发现CpG岛;上游区域共发现245个潜在的转录因子结合位点,分布在启动子候选区内的有Pit-1α、TBP、TBPWT1-κ、Sox-2等.结论 成功构建人ALOX5AP基因启动子荧光素酶报告基因表达载体,生物信息学分析鉴定出启动子候选区,其中含有多个潜在的转录因子结合位点,为ALOX5AP基因的转录调控分析提供了理论依据.