人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定

• 作者: 凌薇 姜旭淦 张天成 汪慧 陈盛霞
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人可溶性生长刺激表达基因2蛋白 真核表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: R446
• 字数: 3372字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2020.02.14

摘要

目的 构建人可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白.方法 根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定.结果 PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用BamHⅠ和HindⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量(Mr)约为65000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位.结论 通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈盛霞	江苏大学医学院	48	347	13.0	16.0
2	姜旭淦	江苏大学医学院	48	252	10.0	14.0
3	汪慧	江苏大学医学院	4	4	1.0	2.0
4	张天成	江苏大学医学院	1	0	0.0	0.0
5	凌薇	江苏大学医学院	3	0	0.0	0.0